親水親脂平衡柱在經過出廠測試后是保存在乙腈/水的流動相體系中的。
?、僭谄胶庵?,請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶;
?、谛轮鶓纫?0-20倍柱體積的甲醇或純乙腈作流動相沖洗。
③如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽或離子對試劑,應注意在乙腈沖洗后用高比例水"過渡"。即每天分析開始前必須先用高比例水沖洗30分鐘以上(防止鹽析出),再用緩沖鹽流動相平衡;分析結束后須先用高比例水沖洗30分鐘以上,除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘(保護柱子)。
親水親脂平衡柱的柱平衡對分離的影響,先解釋一下,當流動相流經過干燥的固定相的時候,發生了什么。
1、干燥活性硅膠,迅速吸收溶劑進入其孔隙當中和表面,尤其是一些極性溶劑,吸收更加明顯。
2、吸收過程中,溶劑將殘留在孔隙中大空氣趕跑,要將整個柱子里面的氣泡全部排凈,大約需要兩到三個柱體積。
3、柱平衡過程中,溶劑吸附到硅膠基質上面,會放出大量的熱量,體系內溫度會隨之上升,很有可能流動相在這個過程中會達到沸點(流速越大,極性越高,產生的熱量就越多),同時這個熱量消散的速度也比較快,往往溶劑前沿部分熱量較高,一個柱體積后即可回到室溫。同時,溫度上升也會導致在流動相接觸到篩板的時候,會產生比較大的背壓。
4、當起始熱量消散后,硅膠表面會繼續吸收溶劑極性成分,柱平衡充分運行之后,吸收的極性溶劑成分也會慢慢的趨于平緩,例如:在乙酸乙酯和正己烷的體系當中,在充分的柱平衡過程中,色譜柱上下兩端的乙酸乙酯的濃度的差異性會逐漸趨于相同。